TY - JOUR T1 - Enhanced Expression of Genes Involved in the Biosynthesis Pathway of Tanshinones in Tetraploid Plants of Salvia Officinalis L. TT - افزایش بیان ژن‌های درگیر در مسیر بیوسنتز تانشینون ها در گیاهان تتراپلوئید مریم‌گلی (Salvia officinalis L.) JF - jcb JO - jcb VL - 14 IS - 41 UR - http://jcb.sanru.ac.ir/article-1-1282-fa.html Y1 - 2022 SP - 184 EP - 193 KW - Colchicine KW - Polyploidy induction KW - RT-PCR KW - Sage KW - Secondary metabolites N2 - چکیده مبسوط مقدمه و هدف: پلی­پلوئیدی یکی از عوامل اصلی سازگاری در گیاهان است که می­تواند تولید متابولیت‌های ثانویه را در گیاهان افزایش دهد. مریم­گلی (Salvia officinalis L.) گیاهی چند ساله از خانواده Lamiaceae با سابقه طولانی استفاده در صنایع دارویی است و تانشینون­ها از ترکیبات فعال حیاتی هستند که در این گیاه تولید می ­شوند. این مطالعه با هدف تجزیه و تحلیل بیان ژن­های درگیر در مسیر بیوسنتز تانشینون­ها در گیاهان دیپلوئید و تتراپلوئید مریم­گلی و مقایسه بین آنها انجام شد. مواد و روش­ ها: پلی­پلوئیدی در مریم­گلی از طریق تیمار بذور آن با کلشی‏سین 0/5 درصد به مدت 24 ساعت القاء شد و گیاهان تترا­پلوئید با استفاده از فلوسیتومتری، مشاهدات کروموزومی، خصوصیات مورفولوژیکی و تعداد روزنه انتخاب و تأیید شدند. استخراج RNA از برگ­ نمونه­های گیاهی دیپلوئید و تتراپلوئید مریم‏گلی، سنتز cDNA و سپس بررسی بیان ژن‌‌های درگیر در مسیر بیوسنتز تانشینون­ها شاملKSL ،IPPI ، CMK و DXR با استفاده از روش واکنش زنجیره­ای پلیمراز در زمان واقعی (Real time PCR) انجام شد. به منظور بررسی بیان ژن‌‌‌‌های مورد نظر با روش RT-PCR در نمونه‌های برگی مریم­گلی، از ژن 18srRNA به عنوان ژن مرجع برای نرمال­سازی داده‌‌ها استفاده شد. برنامه حرارتی برای تکثیر ژن‌‌های مورد نظر توسط روش Real time PCR، شامل فعال‌‌سازی اولیه آنزیم، مرحله واسرشت‌‌سازی و اتصال آغازگرها بود. صحت تکثیر محصول مربوط به هر یک از ژ‌‌ن‌‌ها توسط منحنی ذوبی مربوط به هر ژن تأیید و درستی تکثیر توسط الکتروفورز ژل مورد بررسی قرار گرفت. یافته­ ها: بررسی کیفیت RNAهای استخراج­شده با ژل آگارز یک درصد نشان­دهنده کیفیت نسبتاً خوب RNAهای استخراج­شده بود. منحنی­های ذوب به دست آمده از واکنش PCR در زمان واقعی با استفاده از آغازگرهای مستقیم و معکوس برای ژن‏های هدف نشان داد که آغازگرها در دمای مشخص شده به درستی به جایگاه‏های هدف متصل شده و باعث تکثیر اختصاصی آنها می‏شوند. نتایج واکنش زنجیره­ای پلیمراز در زمان واقعی نشان داد که بیان ژن­های درگیر در مسیر بیوسنتز تانشینون­ها شاملKSL ،IPPI ،CMK و DXR در گیاهان تتراپلوئید به طور قابل توجه و معنی‏داری در مقایسه با گیاهان دیپلوئید افزایش می­یابد. نتیجه­ گیری: در گیاهان تتراپلوئید بیان ژن­های درگیر در بیوسنتز تانشینون‌ها افزایش یافت و این می‌تواند تولید این متابولیت­های ثانویه را افزایش دهد. تجزیه و تحلیل بیان ژن در سری ‏های مختلف پلی­پلوئیدی می­تواند شناخت ما را از سازوکار مولکولی بیوسنتز متابولیت­های ثانویه و بهبود تولید آن­ها از طریق القای پلی‏پلوئیدی افزایش دهد. M3 10.52547/jcb.14.41.184 ER -